MCB 130 L Lecture 1 1 How to

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MCB 130l Lecture 1如何最大限度地利用你的时间

MCB 130l Lecture 1如何充分利用你在实验室2的时间。DNA重组3。做ppt演讲的技巧

1.如何充分利用你在实验室1的时间。很好

1.如何充分利用你在实验室1的时间。做好准备:知道你在做什么,为什么要做。组织3。工作要有条理。做细心周到的笔记。用完后自己清理干净!!

2.重组DNA:创造一种新的组合(例如,

2.重组DNA:创造一种新的组合(如人类和细菌的DNA)克隆=获取多个副本测序3。修改:诱变 ............

•生物技术(如胰岛素、生长激素)

•生物技术(如胰岛素、生长激素)•基础研究(基因结构、功能、保存)•基因治疗

哪些基因组已经测序?•••病毒噬菌体细胞器基因组植物模型

哪些基因组已经测序?•••病毒噬菌体细胞器基因组植物模型生物:酵母、苍蝇、蠕虫脊椎动物(包括人类)

重组DNA生成的基本步骤1。DNA(基因组片段,质粒,2。

重组DNA生成的基本步骤1。DNA(基因组片段,质粒,2。PCR,……3.DNA碎片/消化4。DNA分离纯化形成重组DNA:连接。DNA克隆:转化、选择和扩增

克隆DNA:质粒载体复制来源Polylinker或多克隆位点(MCS) Ampr

克隆DNA:质粒载体复制来源Polylinker或多克隆位点(MCS) Ampr基因(可选)

切断DNA:限制性内切酶细菌产生的位点特异性内切酶识别回文序列(相同

切割DNA:限制性内切酶细菌产生的位点特异性内切酶识别回文序列(两条链上相同的5 ' -> 3 ')进化用于切割噬菌体(病毒)DNA

切断DNA:限制性内切酶钝端粘性端:5 '悬垂3 '悬垂

切断DNA:限制性内切酶钝端粘性端:5 '悬垂3 '悬垂

切断DNA:限制性内切酶。大量限制性内切酶2。大多数人在一个独特的地方分裂

切断DNA:限制性内切酶。大量限制性内切酶2。大多数细胞以独特的顺序分裂。以细菌种类命名

切割DNA:限制性内切酶细菌如何在切割DNA的限制性内切酶的作用下生存?

切割DNA:限制性内切酶细菌如何在切割DNA的限制性内切酶的作用下生存?图4:产生限制性内切酶的细菌细胞也会产生修饰酶,使识别位点上的碱基甲基化。

分离纯化DNA片段:凝胶电泳DNA是带负电荷的移动到

DNA片段的分离纯化:凝胶电泳DNA带负电荷在电场中向(+)极移动

DNA片段的分离纯化:凝胶电泳溴化乙锭-碱基对间插入

分离纯化DNA片段:凝胶电泳溴化乙锭-碱基对间插入-紫外光照射时荧光

连接涉及连接酶:- t4(噬菌体)连接酶-

重组DNA分子的形成:连接涉及连接酶:- t4(噬菌体)连接酶-需要ATP, 5 '磷酸盐-连接粘端比钝端更有效

DNA分子克隆:转化、选择和扩增转化=质粒引入

DNA分子克隆:转化、选择和扩增转化=质粒导入细菌-用Ca. cl2处理细菌,使其具有活性-添加DNA -摄取效率低下2。氨苄西林3的筛选。扩增:细菌复制质粒

特定DNA序列的扩增:聚合酶链反应(PCR)2.3.4.

特定DNA序列的扩增:聚合酶链反应(PCR)2.3.4.一般扩增诊断从古代生物中分离DNA法医学....由UCB博士Kerry Mullis发明,他在1993年获得诺贝尔化学奖

特定DNA序列的扩增:聚合酶链反应(PCR)对数放大:#

特定DNA序列的扩增:聚合酶链反应(PCR)对数放大:拷贝的# = 2 n,循环2的n= #。敏感:单个分子可以被放大。污染问题!

特定DNA序列的扩增:聚合酶链反应(PCR)技术采用:1。DNA聚合酶

特定DNA序列的扩增:聚合酶链反应(PCR)技术采用:1。嗜热细菌DNA聚合酶(Taq)(无校对,错误率1/105)d. ntp (d. ATP, d. CTP, d. TTP, d. GTP)模板=待扩增的DNA引物:与模板互补的18 -20个核苷酸温度循环:20 -30循环95ºC:变性55ºC至60ºC退火72ºC延伸

特异性DNA序列扩增:聚合酶链反应(PCR) 5 ' 3 ' 5 ' 5 ' 3 '

特定DNA序列的扩增:聚合酶链反应(PCR) 5 ' 3 ' 5 ' 5 ' 3 ' 95ºC 55ºC 3 ' 5 '(变性)(退火)3 ' 5 ' 3 ' 72ºC(聚合酶最佳温度)5 ' 3 '循环1(相同程序将重复25 -30次)5 '

特定DNA序列的扩增:聚合酶链反应(PCR)

特定DNA序列的扩增:聚合酶链反应(PCR)

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